HPLC法测定豆浆中的游离氨基酸

摘        要

为研究腐竹生产过程中豆浆游离氨基酸含量的变化情况，本文建立一种测定豆浆中游离氨基酸的反相高效液相色谱法。优化条件为：Zorbax eclipse XDB-C18反相柱（150mm×4.6mm, 5μm）；流动相：甲醇和0.05mol/L醋酸钠的体积比线性梯度（T，B%）=0，0%；20，20%；50，90%，流速：1.0mL/min  ，检测波长：338nm。在此条件下得到18种游离氨基酸的直线回归方程，相关系数都在0.9900以上。豆浆中游离氨基酸含量在0-29.67mg/100mL 之间 ，豆浆煮制过程中大多数游离氨基酸含量逐步增加。回收率在80%-120%之间。

关键词  高效液相色谱法，豆浆，游离氨基酸，柱前衍生，邻苯二甲醛   

目        录

1 前言 1

1.1 大豆的简述 1

1.1.1 大豆的来源 1

1.1.2 大豆的营养价值 1

1.1.3 大豆的健功效 2

1.2 豆浆简述 3

1.2.1 豆浆来源 3

1.2.2 豆浆的营养价值 3

1.2.3 豆浆的保健功效 3

1.3 本论文研究的方法与意义 4

2 材料与方法 5

2.1 材料 5

2.1.1 样品与试剂 5

2.1.1.1 样品 5

2.1.1.2 试剂 5

2.2 仪器 5

2.3 方法 6

2.3.1 试剂的配制 6

2.3.1.1 流动相的配制 6

2.3.1.2 衍生化试剂的配制 6

2.3.2 标准液的配制 6

2.3.2.1 标准氨基酸溶液的配制 6

2.3.2.2 混合标准氨基酸溶液的配制 6

2.4 样品制备 7

2.4.1 豆浆煮制工艺 7

2.4.2 工艺要点 7

2.4.3 样品处理 7

2.5 色谱条件 8

2.6 操作方法 8

3 结果与分析 8

3.1 分离条件的摸索 8

3.1.1. 不同流动相的选择 8

3.1.1.1 手动进样 8

3.1.1.2 自动进样 9

3.1.1.3 不同混合次数的选择 11

3.1.1.4 确定比例 12

3.2 标准定性 13

3.2.1 18种混合标准氨基酸色谱图 13

3.2.2 单标保留时间与色谱图 13

3.3 定量实验 17

3.3.1 标准曲线的绘制与回归方程 17

3.3.2 标准曲线与回归方程 17

3.3.2.1 18种氨基酸标准曲线 17

3.3.2.2 18种氨基酸回归方程 20

3.4 样品处理与测定 20

3.4.1 样品处理的条件选择 20

3.4.2 样品测定 21

3.5 回收率试验 25

3.6 精密度 26

3.6.1 标准精密度 26

3.6.2 样品精密度 27

3.6.3 回收率精密度 28

3.7 稳定性 29

3.7.1 标准稳定性 29

3.7.2 样品的稳定性试验 30

3.8 样品氨基酸态氮含量 31

4 结论与讨论 32

4.1 结论 32

4.2 讨论 32

参 考 文 献 33

英文摘要 34

致    谢 35