米多霉素胞嘧啶衍生物的分离纯化研究
摘要：新型核苷类农用抗生素米多霉素胞嘧啶衍生物（Mildiomycin cytosine analogue，MIL-C）对各种植物的粉状霉菌有强烈的拮抗作用，并且毒性较低。本文主要探索了用离子交换法从发酵液中分离MIL-C的工艺。通过静态筛选，筛选到对MIL-C具有较大静态交换容量和良好吸附过程动力学性能的大孔弱酸性阳离子交换树脂DK110。实验过程考察了不同pH、温度、上样浓度以及上样速度对DK110吸附过程的影响。实验结果表明温度和上样浓度对DK110吸附过程影响不大，实验操作温度可为室温。上样发酵液的pH和流速分别控制在7.0和2BV/h。同时也对洗脱条件进行了优化，确定最佳操作条件为：洗脱流速2BV/h，洗脱剂为2%氨水。另外对MIL-C发酵液的脱色工艺进行了考察，结果表明可选用阴离子树脂D261在pH7.0进行脱色，接触时间约为120min。该脱色工艺的回收率达到了84.71%。
关键词：米多霉素胞嘧啶衍生物；离子交换法；DK110树脂
目录
1 绪论 4
1.1 前言 4
1.2 抗生素分离纯化的研究概况 5
1.2.1 色谱法 5
1.2.2 大孔树脂分离技术 6
1.2.3 膜分离技术 6
1.2.4 离子交换法 7
1.2.4.1 离子交换法概述 7
1.2.4.2 离子交换吸附平衡[13]原理 7
1.2.4.3 离子交换法分离纯化抗生素 8
1.3 米多霉素类化合物的性质与作用 9
1.3.1 米多霉素类化合物的结构和理化性质 9
1.3.2 离子交换法分离米多霉素 9
1.3.3 米多霉素类化合物分离纯化的研究概况 10
2 实验部分 11
2.1 实验材料 11
2.1.1 菌株 11
2.1.2 培养基 11
2.1.3 标准品和其它试剂 12
2.1.4 使用的树脂 12
2.1.5 实验设备 13
2.2 实验内容与方法 14
2.2.1 米多霉素衍生物的生物合成 14
2.2.2 发酵液的预处理 14
2.2.3 树脂的预处理方法 14
2.2.4 树脂再生方法 14
2.2.5 分析方法 14
2.2.5.1 反相HPLC法 14
2.2.5.2 MIL-C的HPLC谱图 15
2.2.5.3 MIL-C标准曲线 15
2.2.5.4 胞嘧啶的标准曲线 16
2.2.6 离子交换树脂的静态筛选 16
2.2.6.1 树脂静态交换容量的确定 16
2.2.6.2 静态吸附动力学曲线的测定 17
2.2.6.3 静态解吸附动力学曲线的测定 17
2.2.7 不同pH值对DK110树脂吸附容量的影响 17
2.2.8 离子交换等温线 17
2.2.9 离子交换树脂穿透曲线的测定 18
2.2.9.1 进料浓度对穿透曲线的影响 18
2.2.9.2 流速对穿透曲线的影响 18
2.2.10 洗脱工艺 18
2.2.10.1 不同洗脱剂对洗脱效果的影响 18
2.2.10.2 不同浓度氨水对洗脱效果的影响 18
2.2.10.3 不同流速对洗脱效果的影响 19
2.2.11 脱色工艺 19
2.2.11.1 分光光度计评价发酵液中色素的含量 19
2.2.11.2 脱色树脂的筛选 19
2.2.11.3 不同pH对脱色效果的影响 20
2.2.11.4 不同接触时间对脱色效果的影响 20
3 结果与讨论 20
3.1 离子交换树脂的静态筛选 20
3.1.1 树脂静态交换容量的确定 20
3.1.2 静态吸附动力学曲线的测定 21
3.1.3 静态解吸附动力学曲线的测定 21
3.2 pH值对DK110树脂吸附容量的影响 22
3.3 离子交换等温线 23
3.4 离子交换树脂穿透曲线的测定 25
3.4.1 进料浓度对穿透曲线的影响 25
3.4.2 流速对穿透曲线的影响 25
3.5 洗脱工艺 26
3.5.1 不同洗脱剂对洗脱效果的影响 26
3.5.2 不同浓度氨水对洗脱效果的影响 27
3.5.3 不同流速对洗脱效果的影响 28
3.6 脱色工艺 29
3.6.1 分光光度计评价发酵液中色素的含量 29
3.6.2 脱色树脂的筛选 30
3.6.3 不同pH对脱色效果的影响 31
3.6.4 不同接触时间对脱色效果的影响 31
4 总结与展望 32
致 谢 33
参考文献 34
