摘要：胰蛋白酶是一种动物来源的蛋白水解酶，分子量为23.8 kD，在医药、食品、工业等领域有广泛的应用。本文研究了胰蛋白酶的固定化方法以及利用固定化胰蛋白水解酪蛋白的过程和相关工艺。论文在建立测定胰蛋白酶活力方法的基础上，采用吸附法筛选出适合固定化胰蛋白酶的大孔弱阴离子交换树脂Duolite A7，优化的树脂添加量为0.5g/10mg 蛋白，固定化催化5批次反应后仍有30％以上的酶活力； pH、温度、包埋量等条件对海藻酸钙固定化胰蛋白酶活力的影响进行了考察，海藻酸钠的浓度为15 g/L，CaCl2的浓度为20 g/L，胰蛋白酶的包埋量为60mg/10mL海藻酸钠，反应最适的温度和pH分别为60℃和7.4。
关键词：胰蛋白酶；固定化；海藻酸钙；Duolite A7树脂
目 录
中文摘要..........................Ⅰ
英文摘要…………………………………………………………………….…..…Ⅱ
目录…………………………………………………………………………..…….Ⅲ
绪论………………………………………………………………………..……1
1.1 胰蛋白酶的研究概述……………………………………………….……1
1.1.1 胰蛋白酶的结构和性质……………………………………………1
1.1.2 胰蛋白酶的生理功效及利用的意义………………………………2
1.1.3 胰蛋白酶的制备方法………………………………………………2
1.2 固定化…………………………………………………………………….4
1.2.1 固定化的发展极其展望……………………………………………4
1.2.2 固定化的方法………………………………………………………4
1.2.2.1 包埋法概述…………………………………………….…5
1.2.2.2 包埋材料及比较……………………………………….…5
1.2.2.3 海藻酸钠的使用寿命……………………………….……6
1.3 胰蛋白酶的固定化研究现状………………………………………….…6
1.3.1 以离子交换树脂作为载体 ………………………………………6
1.3.2 壳聚糖作为载体………………………………………………..…6
1.3.3 以自制的磁性聚乙二醇胶体粒子为载体……………………..…7
1.3.4 介孔分子筛MCM-41为载体………………………………….…7
1.3.5 以包裹Fe304磁性粒子制备了海藻酸钠磁性微球为载体………7
1.4 本文的研究思路和目标……………………………………………...…8
2. 实验部分……………………………………………………………………...…9
2.1 用树脂作介质固定化…...……………………………………………..…9
2.1.1 原料与试剂……………………………………………….……….9
2.1.2 仪器与设备………………………………………………………..9
2.1.3 实验方法………………………………………………..…………9
2.1.3.1 树脂的预处理和再生……………………….……………9
2.1.3.2 树脂的静态吸附……………………………………...…10
2.1.3.3 在用OD275建一个L-酪氨酸标准曲线…………..……11
2.1.3.4 对20mg包埋量的反应速率测试………………………12
2.1.3.5 给酶量对胰蛋白酶活性的影响……………….……..…12
2.1.3.6 树脂添加量对酶活力的影响……….………………..…13
2.1.3.7 固定化酶在重复使用中的操作稳定性……….…….…13
2.2 以海藻酸钙为载体固定化胰蛋白酶…………………………………..14
2.2.1原料与试剂………………..…..…………………………………14
2.2.2仪器与设备………………………………………………………14
2.2.3实验方法……………………………………………………...….14
2.2.3.1 反应温度对海藻酸钙包埋胰蛋白酶活力的影响…..…15
2.2.3.2 pH值对海藻酸钙包埋胰蛋白酶活力的影响………16
2.2.3.3 对固定好的胰蛋白酶进行全波长扫描………………16
3. 结果与讨论………………………………………….……………………..….18
3.1实验结果………………………………………...……………...……….18
3.2实验讨论……………………………………………………...…………18
4. 总结与展望……………………….………………………………………...…19
致谢………………………………….…………………………………………….20
参考文献……………………………………….………………………………….21
