雷帕霉素基因簇的异源表达

雷帕霉素基因簇的异源表达

摘 要：Rapamycin是一种由吸水链霉菌(Str.hygroscopicus)产生的含氮的非典型三烯类大环内酯类抗生素，显示抗真菌、抗炎、抗肿瘤和免疫抑制性能。虽然这些小分子药物在抗肿瘤及免疫抑制等方面表现出极好的效果，[1]但是，它们的天然合成量普遍较低，因此药用成本极高，无法进行实际应用。

通过应用基因簇转移技术，具体来讲是通过构建细菌人工染色体（BAC）文库，我们已分别将雷帕霉素(rapamycin，RAP)这种小分子药物的整个生物合成基因簇转移到几种模式链霉菌中（白色链霉菌S. albus，天蓝色链霉菌S. ceolicolor M512，变铅青链霉菌S. lividans K4-114），得到了包含他们整个生物合成基因簇的基因工程菌。S. albus 28-1-1已经表达出某种具有生物活性的物质，如果能将其分离鉴定，将是非常有意义的工作。

关键词：雷帕霉素；免疫抑制剂；异源表达；优化；基因簇

目  录

中文摘要 I                   

英文摘要 II

目录 III

1. 绪论 1

1.1 目的和意义 1

1.2 雷帕霉素性质 1

1.2.1 雷帕霉素结构性质 2

1.2.2 雷帕霉素药理学性质 3

1.3 雷帕霉素合成途径 4

1.3.1  RAPA化学合成途径 4

1.3.2  RAPA的生物合成 4

1.4 转基因簇技术和组合生物合成 5

1.5 培养条件的优化 6

1.6 我们研究的基础 7

2. 实验部分 8

2.1 实验材料 8

2.1.1 菌种来源 8

2.1.2 培养基组成 9

2.2 培养条件 10

 2.2.1 斜面及平板培养条件 10

2.2.2 种子瓶培养条件 10

2.2.3 发酵瓶培养条件 11

2.2.4 异源表达菌培养条件 11

2.3 分析方法 11

2.3.1 液相色谱法 11

2.3.2 生物活性检测 12

2.3.3 质谱分析 12

3. 结果与讨论 14

3.1 优化前发酵液检测 14

3.1.1 生物活性检测 14

3.1.2 高效液相色谱分析 15

3.2 条件优化后结果 16

3.3 质谱分析 17

4. 结论与展望 20

致谢 21

参考文献 21