农杆菌介导转录因子CBF转化甘蓝型油菜

农杆菌介导转录因子CBF转化甘蓝型油菜

摘 要：油菜是我国最主要的油料作物，有甘蓝型油菜、白菜型油菜和芥菜型油菜等9个种，其中许多是具有重要经济价值的油料与蔬菜作物。但是当环境温度低于10℃～20℃时油菜就会受到伤害，影响它的正常生长发育，严重的甚至造成死亡。目前很多作物在不同程度上都受到低温的影响，低温这一重要的环境因子正严重影响油菜的生长、发展、生存及分布。因此，针对耐逆性（抗寒性）相关的转基因油菜的研究，本试验以成熟油菜“超油2号”种子培养出的下胚轴愈伤组织为受体材料，运用农杆菌介导法将转录因子CBF基因导入供试品种的基因组中，得到的油菜植株经PCR检测，Southern杂交验证分析，获得转基因植株60株，转化频率为1.2%。已转入目的基因植株的耐逆性的鉴定正在准备之中。

关键词：CBF；根瘤农杆菌；PCR；Southern杂交

目  录

中文摘要 I

英文摘要 II

目录 III

1. 绪论 1

1.1 冷驯化及CBF家族概述 1

1.1.1 低温引起的细胞伤害 1

1.1.1.1 冰冻时植物体内冰晶的形成和水份的再分配 1

1.1.1.2 冰冻脱水所引起的伤害 2

1.1.2 冷驯化 2

1.2 CBF家族与植物抗冻性 3

1.2.1 CBF家族的发现 4

1.2.2 CBF基因是受低温诱导的转录因子 4

1.2.3 CBF转录激活因子的结构特点和特性 5

1.2.4 CBF转录激活因子的生理生化功能 6

1.2.5 CBF转录激活因子在提高植物耐逆性中的作用 6

2. 材料与方法 7

2.1 材料 7

2.1.1 植物材料 7

2.1.2 菌株和质粒 7

2.1.3 试剂 7

2.1.4 培养基 7

2.1.5 主要仪器设备 7

2.2 方法 8

   2.2.1 油菜的遗传转化 8

   2.2.2 油菜基因组DNA提取-SDS法 9

   2.2.3 PCR检测 10

   2.2.4 Southern杂交 10

3. 结果与分析 12

3.1 转基因油菜植株的获得 12

3.2 转化植株PCR检测 13

3.3 转化植株Southern杂交分析 13

4. 总结与展望 15

致谢 16

参考文献 17