甲壳素降解酶产生菌的条件优化
摘要：甲壳素是一种极其有前途和极其重要的天然高分子可再生的物质，是不造成环境污染的新型高分子材料。本实验通过对甲壳素降解酶产生菌发酵条件的优化，并设计了Plackett-Burman实验、最陡爬坡实验、响应曲面设计和验证实验，最终确定最优条件为KH2PO4 0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.4g/L，NaCl 0.4g/L，CaCl2·2H2O 0.05g/L，NH4Cl 0.5g/L，SL-7溶液 1ml/L，FeCl2-EDTA 1ml/L，酵母粉 15g/L，接种量 6%，PH=6。优化结果可以使甲壳素降解酶产生菌的酶活性大大提高。
关键词：甲壳素；降解酶；优化
目 录
中文摘要………………………………………………………………………………I
英文摘要……………………………………………………….………………….II
目录……………………………………………………………………………….III
1 绪论…………………………………………………….………………….…1
1.1 内容概述………………………………………………………….……1
1.1.1 甲壳素和壳聚糖的性质………………………………………….2
1.1.2 壳寡糖的应用.3
1.1.3 甲壳素降解酶产生菌的研究历史与产生现状……………8
2 实验部分……………………10
2.1 实验材料……………………………….…………………………. .10
2.1.1 菌种……………………………… ………………………….…10
2.1.2 主要原料和试剂…………………………………………………10
2.1.3 主要仪器……………………………………………………………10
2.1.4 培养基………………………………………………………………10
2.2 实验方法……………………………………………………………11
2.2.1 胶质甲壳素的配制…………………………………………………11
2.2.2 标准曲线的绘制……………………………………………………11
2.2.3 不同碳源对发酵的影响…………………………………………12
2.2.4 不同氮源对发酵的影响…………………………………………12
2.2.5 不同碳源浓度对发酵的影响………………………………………12
2.2.6 不同氮源浓度对发酵的影响……………………………. . . …….12
2.2.7 不同的菌种接种量对发酵的影响…………………………………12
2.2.8 培养基初始pH对发酵的影响……………………………………….12
2.2.9 Zn2+对发酵的影响……………………………………………………12
2.2.10 Cu2+对发酵的影响………………………………………. . ………13
2.2.11 Mg2+对发酵的响…………………………………………………….13
2.2.12 Ca2+对发酵的影响………………………………………………….13
2.2.13 PLACKETT-BURMAN设计实验……………………………………….14
2.2.14 最陡爬坡实验……………………………………………………14
2.2.15 响应曲面设计……………………………………………………14
2.2.16 酶活测定方法……………………………………………………15
3. 结果与讨论…………………………………………………………………16
3.1.1 标准曲线的制作…………………………………………………….16
3.1.2 不同碳源对发酵产酶的影响……………………………. . ……….16
3.1.3 不同氮源对发酵产酶的影响……………………………………….17
3.1.4 不同甲壳素浓度对发酵产酶的影响…………………. . . .……….18
3.1.5 不同酵母粉浓度对发酵产酶的影响………………. . . .………….18
3.1.6 不同接种量对发酵产酶的影响…………………………….………19
3.1.7 不同pH对发酵产酶的影响………………………………………….19
3.1.8 不同Zn2++浓度对发酵产酶的影响………………. . . .…………………20
3.1.9 不同Cu2+浓度对发酵产酶的影响…………………………………20
3.1.10 不同Mg2+浓度对发酵产酶的影响………………. . . .………….…21
3.1.11 不同Ca2+浓度对发酵产酶的影响………………. . . .………….…22
3.1.12 PLACKETT-BURMAN设计实验22
3.1.13 最陡爬坡实验………………………………………………….…23
3.1.14 响应曲面设计. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24
4 总结与展望…………………………………………………………. .…….…28
致 谢………………………………………………………………. . . . .….…30
参考文献………………………………………………. .………………………………………31
附录
