地龙活性蛋白的分离提取

摘    要

地龙(Geosaurus)，又名蚯蚓，属环节动物门寡毛纲类，在我国是一种非常传统的动物类中药材。10年版的《中华药典》中，记载着它的功效为清热定惊，通络，平喘，利尿。地龙体内富含蛋白质，含有胶原酶、纤溶酶、蚓激酶、核酸、微量元素等多种成分，具有改善微循环、溶解血栓等作用。本实验的目的是探索并优化一种地龙体内活性蛋白的分离与提取方法，并使工艺更适合大批量的、药用的生产。

传统的地龙蛋白提取方法主要有匀浆法，浸泡煎煮法等。这些提取工艺、提取条件等都还不成熟，主要缺点包括提取时间长，提取效率低，获得的蛋白质纯度低并且不适于大量的工业生产。因而本实验在提取工艺流程中综合性的应用了闪提、超声与离心等工艺手段，缩短了提取时间并提高了提取效率，再与一些纯化处理过程互相配合，提取出含有多种地龙活性蛋白的蚓多酶。本实验通过单因素实验与正交试验设计，对影响蛋白质收率的一些因素，包括固液比，pH值和闪提时间进行了优化。

本实验得到的最佳工艺条件是：固液比1:4，pH值7.7，闪提时间30s；得到的蛋白质含量为13.52%。

关键词：地龙，活性蛋白，提取工艺，正交试验，蚓激酶

目录

1绪论 1

1.1课题背景及目的 1

1.1.1地龙 1

1.1.2地龙活性蛋白 2

1.1.3地龙活性蛋白的分离提取方法 3

1.2 国内外研究现状 4

1.3 研究内容及方法 5

2 实验材料与方法 6

2.1 实验材料 6

2.1.1 原材料 6

2.1.2 试剂 6

2.1.3 仪器设备 6

2.2 实验方法 7

2.2.1 原材料含水量的测定 7

2.2.2 实验方法一 ——冷冻干燥法 7

2.2.3 实验方法二 ——硫酸铵沉淀法 9

2.2.4 实验方法三 ——乙醇乙醚双脱水法 13

2.3地龙提取物中蛋白质含量的测定 16

2.3.1检测原理 16

2.3.2考马斯亮蓝法 16

2.3.3地龙提取物中蛋白质含量的测定 17

2.4 单因素试验设计 17

2.5 正交试验设计 20

3实验结果与讨论 24

3.1三种工艺的提取结果 24

3.2单因素试验结果 25

3.3正交试验结果 28

结论 30

致谢 32

参考文献 34