固定化酶水解植物蛋白的条件研究及其固定床的探索

固定化酶水解植物蛋白的条件研究及其固定床的探索

摘 要：酶具有专一性强，催化效率高和作用条件温和等显著特点，但是在酶的使用过程中，人们也注意到了酶的一些不足之处：（1）稳定性差；（2）一次性使用；（3）产物的分离纯化较困难。为此，固定化技术在这一领域的应用越来越广泛。

本实验采用海藻酸钠作为载体包埋固定化中性蛋白酶。探索了中性蛋白酶在海藻酸钠中的固定化技术，并对影响固定化酶活性的因素进行了研究。通过改变固定化的制作条件，确定最佳的固定化参数。实验表明，固定化酶的质量受多方面因素的影响，在最适pH和温度一定的情况下，以海藻酸钠的浓度、固定化酶量、固定化时间以及大豆蛋白液底物浓度这4个因素的影响最大，并对这些因素进行单因素分析，得出最佳底物浓度（大豆：水）为1：7；最适固定化时间为2.5h；最适酶浓度（酶量w：海藻酸钠溶液体积v）为1%；最适海藻酸钠浓度(w/v)为3%。

并在此最佳单因素条件下，比较了固定化中性蛋白酶在摇床和固定床中的水解效果，结果表明：在固定床中与在摇床中的水解效果相差不大，但在固定化酶使用次数和时间方面有很大的改善，从而使得酶的利用率更高；而且实现批量或连续操作模型的可能，更适于产业化、连续化、自动化生产。

关键词：海藻酸钠；固定化；中性蛋白酶;植物蛋白；固定床

目  录

中文摘要 I

英文摘要 II

目录 III

1. 绪论 1

1.1 大豆蛋白的研究背景 1

1.2 固定化酶的研究背景 1

   1.2.1 酶固定化的方法 1

   1.2.2 固定化酶的应用 2

1.3 固定化酶水解大豆蛋白的优势 3

2. 实验部分 4

2.1 材料与准备工作 4

2.1.1 实验材料与仪器设备 4

2.1.2 准备工作 5

  2.2 实验方法 6

2.2.1 酶的固定化方法 6

2.2.2 自制固定床的安装 7

2.2.3 游离氨基的测定方法 7

2.2.4 实验流程 8

3. 结果与讨论 9

  3.1 NaOH标准溶液的浓度 9

  3.2 空白溶液的滴定 9

  3.3 固定化酶与游离酶的性能比较 9

  3.4 单因素实验确定固定化条件 10

3.4.1 海藻酸钠浓度对酶固定化的影响 10

3.4.2 固定化时间对酶固定化的影响 11

3.4.3 固定化酶浓度对水解效果的影响 12

3.4.4 底物浓度对水解效果的影响 13

  3.5 固定化酶在固定化床与摇床中的比较实验 14