藤梨根多糖的分离提取及生物活性分析
摘要：藤梨根（Radix Actinidiae Argutae）作为一种常用抗肿瘤中药,在临床医药方面具有很好的功效。近几年来,随着国内外对藤梨根研究的逐渐深入,人们陆续从藤梨根中提取出多种天然成分,其中不乏活性很好的化合物。因此中药藤梨根的抗肿瘤作用越来越受到国内外研究者的重视,具有不错的发展潜力和市场前景。
藤梨根多糖是藤梨根中的重要抗肿瘤成分，具有显著的生物学活性。但是,目前关于藤梨根多糖的分离纯化及抗肿瘤活性分析的研究报道甚少。我们经过沸水提取，乙醇沉淀，Sevag＋酶解法脱蛋白，DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析，Sephadex G-100凝胶过滤层析得到纯化的藤梨根多糖Ⅱa、Ⅱb（APSⅡa、APSⅡb）。通过正交试验筛选出最佳浸提条件组合为料液比1：20、浸提温度100℃、提取时间4.0hr。试验表明用乙醇沉淀多糖，乙醇的倍数是决定沉淀率的主要因素。通过实验，确定3倍体积乙醇为最佳沉淀倍数。
最后在体外通过MTT法研究分离出的藤梨根多糖组分对癌细胞的凋亡影响。结果显示，组分APSⅡb对肺腺癌细胞SPC-A1有抑制作用，并且表现出一定的剂量依赖性。而组分APSⅠ和APSⅡa虽然对肺腺癌细胞有一定的抑制作用，但抑制作用并未随着用药量的增加而增加，因此认为其不具备抗肿瘤活性。藤梨根多糖APSⅡb能明显抑制癌细胞增殖，促进细胞凋亡。其具体的抗肿瘤机制有待进一步的研究。
关键词：藤梨根；多糖；分离纯化；MTT；抗肿瘤
目 录
中文摘要............................................................................................Ⅰ
英文摘要…………………………………………………………………….…..…Ⅱ
目录…………………………………………………………………………..…….Ⅴ
绪论………………………………………………………………………..……1
2. 实验部分………………………………………………………...………………3
2.1 实验材料与仪器…………………………………………...……………..3
2.1.1 实验材料…………………………..………………………………..3
2.1.2 实验试剂………………………..…………………………………..3
2.1.3 实验仪器…………………………..………..………………………3
2.2 实验方法…………………………………………………...……………..4
2.2.1 藤梨根多糖的提取……………………………………….………...4
2.2.1.1 藤梨根粗多糖的提取………………………………………...4
2.2.1.1.1 粗多糖提取流程………………………………………..4
2.2.1.1.2 藤梨根多糖提取条件的优化…………………………..5
2.2.1.2 标准葡萄糖曲线制作及糖含量测定………………………...7
2.2.1.3 脱蛋白………………………………………………………...7
2.2.1.4 粗多糖的脱色………………………………………………...8
2.2.2 藤梨根多糖的纯化…………………………………………………8
2.2.2.1 DEAE-Sepharose Fast Flow 阴离子交换层析…………...….8
2.2.2.2 Sephadex G-100凝胶过滤层析……………………………....9
2.2.3 生物活性分析…………………………………………………….…9
2.2.3.1 癌细胞种类…………………………………………………....9
2.2.3.2 对癌细胞抑制影响的测定………………………………...….9
3.结果与讨论………………………………………………….……….………..….10
3.1 藤梨根多糖的提取…………………………………………………….....10
3.1.1 藤梨根粗多糖的提取………………………...……………….…....10
3.1.2 多糖提取条件的确定…………………….........……………..…….10
3.1.2.1 单因素实验…….......................................................................10
3.1.2.2 正交实验……...........................................................................14
3.1.3 标准葡萄糖曲线制作及糖含量测定……........................................15
3.1.4 脱蛋白方法比较……........................................................................16
3.2 藤梨根多糖的纯化…….............................................................................17
3.2.1 DEAE-Sepharose Fast Flow 阴离子交换层析……..........................17
3.2.2 Sephadex G-100凝胶过滤层析……..................................................18
3.3 生物活性分析……......................................................................................20
4. 总结与展望……....................................................................................................20
4.1 藤梨根多糖的提取……..............................................................................21
4.2 藤梨根多糖的纯化……..............................................................................21
4.3 藤梨根多糖的生物活性分析……..............................................................22
致谢…….....................................……........................................................................24
参考文献…….....................................……................................................................25
中英文对照…….....................................……............................................................27
