尿酸酶制剂在鸡体内的应用研究
目录
第一部分 前言 2
1尿酸酶的研究简史[3，4] 3
2核酸疫苗 4
2.1质粒载体的生物学特征 5
2.2 pET28a和pcDNA3.1-Uc的结构特征 5
3酶类制剂 7
3.1酶纯化方法[10] 8
3.2酶含量的测定 9
3.3尿酸酶活性的测定方法[12] 9
3.3.1终止反应法（Stopped Method） 9
3.3.2连续反应法（Continuous Method） 10
4高尿酸血症动物模型的研究[14] 10
4.1建立高尿酸酶血症动物模型的基本原理 11
4.2动物的选择 12
4.3 鸡痛风病模型的研制 13
5 实验目的和意义 15
第二部分 尿酸酶的核酸（pcDNA3.1-UC质粒）制剂在鸡体内的表达研究 15
1材料与方法 15
1.1 材料 15
1.1.1 菌种和质粒 15
1.1.2试剂和溶液配置 15
1.1.3 仪器 19
1.2实验方法 20
1.2.1菌体的活化 20
1.2.2质粒pcDNA3.1-UC大量制备 20
1.2.3质粒pcDNA3.1-UC的琼脂糖凝胶电泳 21
1.2.4经RNA酶消化后的pcDNA3.1-UC质粒的琼脂糖凝胶电泳 21
1.2.5离子交换层析纯化pcDNA3.1-UC质粒 21
1.2.6 PCR鉴定纯化质粒为pcDNA3.1-UC 23
1.2.7 pcDNA3.1-UC质粒在鸡体内的表达的检测 24
2结果与分析 27
2.1 电泳检测提取的pcDNA3.1-UC质粒 27
2.2经RNA酶消化后的pcDNA3.1-UC质粒的琼脂糖凝胶电泳检测 27
2.3 DEAE离子交换层析曲线 28
2.4 纯化质粒为pcDNA3.1-UC PCR鉴定 29
2.5 pcDNA3.1-UC质粒在鸡体内的表达分析 29
2.5.1质粒DNA溶液浓度的测定实验结果 29
2.5.2 鸡血清尿酸含量测定试验结果: 30
3讨论 34
第三部分 尿酸酶制剂在鸡体内的应用研究 34
1材料与方法 34
1.1材料 34
1.1.1菌种 34
1.1.2 试剂及其配置 34
1.1.3 仪器 37
1.2 实验方法 38
1.2.1 酶活性的检测 38
1.2.2菌体的培养及诱导表达 39
1.2.3表达产物的提取 39
1.2.4硫酸铵分段盐析 40
1.2.5 酶蛋白浓缩 40
1.2.6分子筛层析分离BL21/ pET28a-UC表达产物 40
1.2.7 鸡血清尿酸含量测定 43
1.2.8 ELISA实验检测鸡尿酸酶抗体 44
2 结果与分析 46
2.1分子筛（sephadex-200）纯化BL21/ pET28a-UC表达产物的结果 46
2.2尿酸酶溶液中酶活性测定的实验结果 46
2.3 酶蛋白的DEAE离子交换曲线及结果 47
2.4尿酸酶溶液的浓度测定实验结果 48
2.5已纯化的尿酸酶SDS PAGE结果 48
2.6 鸡尿酸含量测定试验结果 49
2.7 ELISA实验结果 52
3讨论 53
第四部分 创新点与总结 53
参考文献 54
致谢 58
第一部分 前言
尿酸酶（Urate Oxidase,Uricase;EC1.7.3.3）是生物体内嘌呤降解代谢途径中一种酶，其以分子氧作为受体催化尿酸氧化生成尿囊素、二氧化碳和过氧化氢。动物、植物、真菌、酵母和细菌均发现有此酶的存在。大多数生物体在嘌呤代谢中产生尿酸，许多微生物能够直接将尿酸分解而排除体外，但在高等哺乳动物（猿和人类）体内却缺乏有生物活性的尿酸氧化酶，而以尿酸作为嘌呤代谢的终产物。如果人体内嘌呤代谢紊乱，就产生过量尿酸或者尿酸排泄受阻，血液中尿酸浓度增加，形成高尿酸症。在临床上，尿酸氧化酶可用于酶法测定尿酸浓度而诊断痛风症，还可以用于治疗血液高尿酸和痛风等疾病。该酶因其高特异性和灵敏度被广泛应用，作为诊断和治疗痛风症等疾病的重要指标，并且应用尿酸酶电极测定人体血液中尿酸的浓度可帮助诊断肿瘤、白血病、肾炎等疾病。
