丙酮酸高产菌株的选育

丙酮酸高产菌株的选育

摘 要：本论文通过对出发菌株运动酵母单胞菌进行耐酸性试验使其能在酸度较高的环境中存活，然后对耐酸性试验得到的耐高酸菌株进行物理化学诱变，如紫外-EMS（甲基磺酸乙酯）联合诱变，加热诱变，紫外-NTG（亚硝基胍）联合诱变，并利用TTC加层平板法和CM,MM平板法筛选到一株高产的丙酮酸菌株。然后对筛选得到的高产菌株进行摇瓶发酵，并利用HPLC法，2，4-二硝基苯肼法，硝酸铁法测得发酵液中丙酮酸的含量。

关键词：丙酮酸 诱变 HPLC 2，4-二硝基苯肼 硝酸铁

目  录

中文摘要 I

英文摘要 II

目录 III

1. 绪论 1

1.1 丙酮酸简介 1

1.2 丙酮酸应用 1

1.2.1 丙酮酸在医药方面的应用 1

1.2.2 丙酮酸在农药方面的应用 2

1.2.3 丙酮酸在化妆品行业中的应用 2

1.3 丙酮酸的生产方法 3

1.3.1 化学合成法 3

1.3.2 微生物发酵法 4

1.4 丙酮酸的代谢途径及高产菌株选育的原理 4

1.4.1 代谢途径 4

1.4.2 丙酮酸高产菌株选育的原理 5

2. 实验部分 6

2.1 实验材料 6

2.1.1 出发菌株 6

2.1.2 主要仪器设备 6

2.1.3 培养基 6

2.2 耐酸性实验 7

2.2.1 实验准备 7

2.2.2 实验方法 7

2.3 诱变方法 7

2.3.1 紫外-EMS（甲基磺酸乙酯）联合诱变 7

2.3.2 加热诱变 9

2.2.3 紫外-NTG（亚硝基胍）联合诱变 9

2.2.4 DES（硫酸二乙酯）诱变 10

2.4 筛选方法 11

2.4.1 TTC加层平板法 11

2.4.2 CM,MM平板法 12

2.5 发酵液中丙酮酸含量的测定 12

2.5.1 2，4-二硝基苯肼法（DNS法） 12

2.5.2 硝酸铁法 13

2.5.3 液相色谱法（HPLC法） 13

3. 结果与讨论 14

3.1 耐酸性实验结果 14

3.2 筛选结果 16

3.2.1 TTC加层平板法筛选结果 16

3.2.2 CM,MM平板法筛选结果 16

3.3 丙酮酸含量测定结果 17

3.3.1 2，4-二硝基苯肼法（DNS法） 17

3.3.2 硝酸铁法 18

3.2.3 液相色谱法（HPLC法） 19

4．总结与展望 22

4.1 总结 22

4.2 展望 23

致谢 24

参考文献 25