链球菌噬菌体裂解酶在大肠杆菌中表达的初步研究

链球菌噬菌体裂解酶在大肠杆菌中表达的初步研究

摘 要：本文研究重组菌plyC高密度发酵在大肠杆菌中诱导表达的条件。首先利用自控式5L发酵罐进行链球菌噬菌体裂解酶A链（plyCA）工程菌补料式发酵，对补料时机、诱导时间、诱导剂量对链球菌噬菌体裂解酶(plyC)A链和B链（plyCA,plyCB）在大肠杆菌中表达情况的影响进行研究，以SDS-PAGE检测方法来检测目的蛋白表达情况。结果表明，补料时机在发酵进行3.5 h后加入，以一定速度连续加料，并加入诱导剂培养。另以1.7 mmoL/L IPTG诱导表达实验表明，诱导时间为4小时链球菌噬菌体裂解酶重组菌表达的目的产物量最高。用30 μL IPTG诱导使其终浓度为1 mmoL/L可使PLYCA和PLYCB的表达量相对较高。

关键词：链球菌噬菌体裂解酶；大肠杆菌；高密度发酵；诱导表达

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中文摘要I

英文摘要．Ⅱ

目录 Ⅲ

1．绪论．1

1.1链球菌产生疾病的现状1

1.2噬菌体裂解酶简介1

1.3噬菌体裂解酶的作用．..2

1.4本研究的意义．3

2 实验部分4

2.1实验材料及仪器．4

2.1.1 材料4

2.1.1.1菌种4

2.1.1.2培养基4

2.1.1.3其他．4

        2.1.2 仪器5

2.2 实验方法5

2.2.1 培养基的配制5

2.2.2.试剂的配制．6

2.2.3.菌种复苏．7

2.2.4.菌液培养7

2.2.5.发酵培养7

2.2.6.诱导和补料发酵7

2.2.7.诱导时间不同的培养．8

2.2.8.诱导剂量不同的培养．8

2.2.9.分析检测方法8

2.2.9.1细胞密度的测定．8

2.2.9.2湿菌体量的测定．8

2.2.9.3蛋白表达情况检测8

3 结果与讨论．10 

3.1工程菌的发酵10

3.2不同诱导时间对重组菌表达量的影响12

3．3 诱导剂用量不同对重组菌表达量的影响．13

4．总结与展望．14

致谢．16

参考文献．17