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| 文档题目： |
GST融合蛋白原核表达条件的优化及纯化分析 |
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| 上传会员： |
aesxtepe |
| 提交日期： |
2013-07-30 21:00:07 |
| 文档分类： |
生物工程 |
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45 |
| 下载次数： |
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| 下载地址： |
 GST融合蛋白原核表达条件的优化及纯化分析 (需要:50 积分) 如何获取积分? |
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| 文档字数： |
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文档字数：20576 GST融合蛋白原核表达条件的优化及纯化分析 摘 要：本论文主要研究人CD154蛋白的原核表达。在GST原核表达最优条件下进行大量表达，并经过GST柱层析纯化，以获得纯度较高的目的蛋白用于免疫学实验。本研究是根据目的蛋白CD154基因序列设计合成特异性引物，PCR扩增基因，并插入到融合蛋白原核表达载体pGEX－4T－1中，得到重组表达质粒pGEX－4T－1/CD154，用此重组质粒转化大肠杆菌DH5-α细胞，转化菌落经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切鉴定。并通过采用不同IPTG诱导浓度及不同的培养温度和时间，使GST融合蛋白在大肠杆菌DH5-α中得到最大表达，并采集样品进行SDS-PAGE电泳鉴定表达产物。通过对转化后的大肠杆菌进行SDS-PAGE电泳分析，发现明显的出现了54kD蛋白带。且最佳表达条件：37℃，IPTG诱导浓度0.2mM，诱导时间4h。本研究成功构建了GST原核表达质粒，并在大肠杆菌中表达出GST融合蛋白，经过提纯的GST融合蛋白可以用于更深层次的免疫实验。 关键词：GST融合蛋白；原核表达；大肠杆菌；SDS-PAGE
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