贻贝蛋白及其酶解物的抗氧化活性研究

贻贝蛋白及其酶解物的抗氧化活性研究

中文摘要：本论文以贻贝为原料，采用酶解方法制备具有显著抗氧化作用的活性肽。分别构建DPPH自由基体系，Fenton体系，超氧自由基体系，金属螫合力的测定体系以及还原力的测定体系，对贻贝粗蛋白与贻贝酶解物的抗氧化活性进行比较研究，并以还原性GSH为对照，最终评价贻贝酶解的效果以及贻贝酶解物的抗氧化活性。

关键词：贻贝；酶解物；DPPH·；抗氧化；还原力；金属螫合；超氧；Fenton;

目  录

中文摘要 I

英文摘要 II

目录 III

1. 绪论 1

1.1 自由基代谢理论 1

1.2 自由基对生物机体的损伤及机制 1

1.3 自由基的清除及防御措施 2

1.4 抗氧化剂概述 2

1.5 体外评价抗氧化的方法 4

   1.5.1 DPPH自由基体系 4

1.5.2 还原能力的测定体系 4

1.5.3 金属螯合能力测定体系 4

1.5.4 羟自由基体系 4

1.5.5 邻苯三酚体系 5

1.6 实验背景 5

2. 实验部分 6

2.1 实验材料 6

2.2 实验试剂 6

2.3 实验仪器 6

2.4 实验方法 7

2.4.1 贻贝粗蛋白的制备 7

2.4.2 贻贝粗蛋白酶解物的制备 7

2.4.3 不同蛋白酶水解贻贝粗蛋白 7

2.4.4 酶解过程中的测定指标 7

2.4.4.1 蛋白质回收率的测定 7

2.4.4.2 水解度(DH)的计算 8

2.4.5 DPPH 自由基体系 8

2.4.6 还原力的测定体系 8

2.4.7 金属螫合力的测定体系 8

2.2.8 羟基自由基体系 9

2.2.9 超氧自由基体系 9

3 结果与讨论 9

3.1 贻贝粗蛋白的成分分析 9

3.2 不同蛋白酶对贻贝粗蛋白的水解能力 10

3.3 碱性蛋白酶Alcalase水解贻贝粗蛋白条件的探讨 11

3.3.1 酶和底物浓度比[E]/[S]对DH的影响 11

3.3.2 不同pH值对DH的影响 12

3.3.3 不同温度对DH的影响 12

3.4 DPPH自由基体系 13

3.5 还原力的测定 13

3.6 金属螫合力的测定 14

3.7 羟基自由基体系 15

3.8 超氧自由基体系 16

4 结 论 17

致    谢 18

参考文献 18