乳酸菌的分离及其产GABA发酵条件的优化

乳酸菌分离及其产GABA发酵条件的优化

摘要：本文从市售酸奶中分离到一株产GABA的乳酸菌，经形态学和生理生化鉴定，初步确认为德氏乳杆菌。探索比色法测定GABA浓度时，发现2%的苯酚浓度、2.08%的次氯酸钠浓度对实验测定有利。虽然此法适用于大量样品的检测，但容易受到溶液中游离氨的影响，对复杂成分检测GABA不准确。探索纸层析-分光光度法测定GABA浓度时，发现展开剂（正丁醇：冰醋酸：水）体积比为4:1:3、显色温度和时间分别为80℃，30min，在510nm处测定洗脱液波长时，对实验测定有利。经过pH、温度、接种量这3个单因素试验及正交优化后，发现在pH6.5,温度30℃，接种量7%时GABA产量为0.177 g/L，可以作为糙米生物转化产GABA的初步探索。

关键词：γ-氨基丁酸；德氏乳杆菌；糙米；GABA检测

目  录

中文摘要 I

英文摘要 II

目  录 III

1 绪论 1

1.1  乳酸菌简介 1

1.1.1  乳酸菌生理及作用 1

1.1.2  乳酸菌的工业应用 1

1.2  γ-氨基丁酸的研究状况 2

1.2.1  γ-氨基丁酸的分布 2

1.2.2  γ-氨基丁酸制备 3

1.2.3  γ-氨基丁酸功效 5

1.3  γ-氨基丁酸的检测技术 6

1.4  选题意义 6

2  实验部分 8

2.1  实验材料 8

2.1.1  供试菌种 8

2.1.2  培养基 8

2.1.3  实验仪器 9

2.1.4  实验试剂 10

2.2  实验方法 10

2.2.1  GABA检测 10

2.2.1.1  发酵液的处理 10

2.2.1.2  GABA定性测定 10

2.2.1.3  比色法测定GABA 10

2.2.1.4  纸层析—分光光度法测定GABA 11

2.2.2  乳酸菌分离与鉴定 12

2.2.2.1  乳酸菌分离 12

2.2.2.2  乳酸菌产GABA的定性测定 12

2.2.2.3  乳酸菌保藏 12

2.2.2.4  乳酸菌鉴定 12

2.2.3  材料处理 15

2.2.3.1  番茄处理 15

2.2.3.2  糙米酶解 15

2.2.4  乳酸菌发酵产GABA 15

2.2.4.1  糙米培养基的简单试验 15

2.2.4.2  GABA发酵条件的优化 16

3  结果与分析 17

3.1  GABA检测 17

3.1.1  比色法测定GABA 17

3.1.2  纸层析—分光光度法测定GABA 18

3.2  乳酸菌分离与鉴定 21

3.2.1  乳酸菌产GABA的定性测定 21

3.2.2  乳酸菌鉴定 21

3.2.2.1  乳酸菌形态学观察 21

3.2.2.2  乳酸菌生理生化结果 22

3.3  乳酸菌发酵产GABA 23

3.3.1  糙米培养基的简单试验 23

3.3.2 GABA发酵条件的优化 24

3.3.2.1初始pH的影响 24

3.3.2.2温度的影响 25

3.3.2.3接种量的影响 25

3.3.2.4正交试验 25

4 讨论与总结 28

5 展望 29

致谢 30

参考文献 31