ARMS-PCR快速检测p53基因突变热点方法的建立及优化

ARMS-PCR 快速检测 p53 基因突变热点的建立及优化

摘　　要

建立经济简便、特异、灵敏的 ARMS-PCR 快速检测方法，实现对 p53 基因外显子突变热点的快速鉴定。针对7个覆盖 p53 基因90%突变类型以上的突变热点，扩增健康人基因组中突变对应所在外显子，并将扩增片段插入 T 载体后点突变引入突变热点。通过调整 PCR 体系与引物特异性建立 ARMS-PCR 优化反应体系。应用优化的 ARMS-PCR 反应体系对临床癌症患者石蜡包埋组织与正常人样本进行筛选、鉴定。实验中成功扩增获得了三个目的外显子，并引入突变热点，建立优化的 PCR 体系。对10个临床癌症患者石蜡包埋组织和10个健康人基因组 DNA 样品筛选：10个临床癌症患者石蜡包埋组织共检测出22个突变，10个健康人基因组 DNA 样品没有突变检出。该法简便快捷、特异性强，能为临床治疗与预后提供重要信息，是具有广阔临床应用前景的突变检测方法。

关键词: p53 基因　突变热点　ARMS-PCR

目　　录

摘要 I

ABSTRACT II

1前言 1

1.1研究背景 1

1.2 p53 基因 1

1.3突变检测的方法 2

1.4研究趋势及其展望 5

2材料与方法 6

2.1实验材料 6

2.1.1实验样品 6

2.1.2菌种和质粒 6

2.1.3实验试剂 6

2.1.4实验仪器 7

2.2实验方法 8

2.2.1实验流程示意图 8

2.2.2基因组DNA的提取 8

2.2.3引物的设计 10

2.2.4突变热点所在外显子的 PCR 扩增 12

2.2.5野生型质粒的点突变 14

2.2.6 ARMS-PCR模型的建立与优化 15

2.2.7 ARMS-PCR对样品的检测 16

3结果与分析 18

3.1实验结果与分析 18

3.1.1基因组DNA电泳图 18

3.1.2外显子扩增及菌液PCR鉴定电泳图 18

3.1.3质粒提取电泳图 19

3.1.4点突变测序结果分析图 19

3.1.5 ARMS电泳图 21

3.1.6样品ARMS-PCR检测结果 24

3.2小结 26

4总结 28

参考文献 29

谢辞 31