柱花草的NBS类抗病基因类似物的分离及分析

柱花草的NBS类抗病基因类似物的分离及分析

摘　要：利用已知的植物R基因NBS序列中保守区域设计简并引物, 以热研2号柱花草（Stylosanthes guianensis cv.Reyan No 2）基因组DNA为模板进行 PCR扩增，获得500 bp的PCR产物，通过克隆、测序和序列比得到了3条 RGAs，分别命名为 SG1,  SG2和 SG3，它们全部具有连续的 ORF。利用柱花草的3条 RGAs在GenBank上进行相似性搜索，同源性比较分析表明，它们与已克隆的抗病基因或抗病基因片段有不同程度的同源性。对它们的推断的氨基酸序列进行结构分析表明，它们包括了“P-loop”、“Kinase-2”、“kinase-3”、“GLPL”4个抗病基因所共有的保守模体。进行系统发育树分析表明, 这3个RGAs分为 TIR (Drosophila Toll or human interleukin receptor-like) 和 non-TIR两类, 与前人所报道的R 基因进化一致。说明柱花草NBS类RGAs可能和其他物种具有同样的起源和进化机制。

关键词：柱花草  NBS  RGAs  序列分析

目录

摘　要 1

目录 2

1 前言 2

2 材料和方法 3

2.1 材料 3

2.2 方法 4

2.2.1 DNA提取 4

2.2.2 PCR扩增 5

2.2.3 TA克隆 6

2.2.4数据处理 7

3 结果分析 7

3.1 DNA的提取效果分析 7

3.2 柱花草中NBS抗病基因的分离与鉴定。 7

3.3 柱花草中NBS抗病基因序列和氨基酸序列的分析 9

4 讨论 15

4.1 柱花草RGAs的分离与鉴定 15

4.2 柱花草RGAs的多样性及进化关系分析 15

参　考　文　献 16

致    谢 18