高等植物叶绿体的分离和制备

高等植物叶绿体的分离和制备

一、高等植物叶绿体的分离和制备实验目的
 了解植物叶绿体的分离和制备方法，学习测定叶绿体浓度的方法。

二、高等植物叶绿体的分离和制备实验原理
 分离和制备有活性的离题叶绿体是研究叶绿体的结构功能、光合作用原理及遗传控制机理的前提。要分离有活性、较纯的完整叶绿体相当困难，有些植物叶片细胞的细胞比较厚，叶绿体不易从细胞中分离出来；有些植物叶绿体外膜极易破损，有些植物叶片细胞中含有某些内源性抑制物质。例如：水解酶、氧化酶等，在制备过程中极易释放出来，破坏叶绿体的结构和活性。因此，不是所有的高等植物都适合用来分离和制备叶绿体，最常用的植物材料有菠菜、豌豆、玉米、甜菜、大麦等。此外，低等植物如衣藻、小球藻等也是常用的材料。
    分离和制备叶绿体的方法很多，目前最常用且较方便的是分步差速离心的方法。一般叶绿体的直径约为几个微米，因此细胞破碎后在一定的离心力范围内即能分离获得叶绿体。

三、高等植物叶绿体的分离和制备主要仪器、材料与试剂
  1、器材：玻璃研钵，石英砂，纱布，烧杯，离心管，吸管等
  2、材料：选用生长好、叶色鲜绿的青菜叶片
  3、试剂：叶绿体制备液中含有：
 蔗糖          0.33 M          EDTA        2 mM
 MgCl2                  1 mM          异抗坏血酸   2 mM
 K2HPO4        0.5 mM          Na2P2O7      2 mM
 Hepes         50 mM    pH 7.6(用1M NaOH调节)
     所有药品均需分析纯级的。