细胞生物学实验——细胞骨架显示

细胞骨架显示

一、实验目的

掌握利用考马斯亮蓝R250染色法显示、观察植物细胞微丝的方法。

二、实验原理 

用含去垢剂Triton X－100的缓冲液处理植物细胞，可将细胞的膜结构和大部分其他蛋白抽提掉，剩下细胞骨架系统的蛋白，再用蛋白染料考马斯亮蓝R250染色，在光学显微镜下即可显示骨架结构。   

三、实验准备知识

1、细胞骨架定义

1） 细胞骨架（cytoskeleton）是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。

2） 广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微丝（microfilament，MF）、微管（microtubule，MT）、中间纤维（intermediated filament，IF）。

2、微丝、微管、中间纤维

1) 微丝：粗约6nm，属肌动蛋白（actin）细丝；主要作用是确定细胞表面特征、使细胞能运动和收缩；

微管：为直径约20～26nm的长度不一的小管，管壁由13根纵列的原丝构成；主要确定膜性细胞器的位置和作为膜泡运输的导管；

中间丝：也叫中间纤维，直径在微丝和微管之间（7～11nm）；中间纤维是最稳定的骨架成分，使细胞具有张力和抗剪切力，主要起支撑作用，围绕细胞核成束、成网、并扩展到细胞质与质膜相连。