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过氧化物酶活性的测定

过氧化物酶活性的测定
上传会员: pengcheng
提交日期: 2014-06-01 11:16:22
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文档字数:

字数:19841

 Ⅰ、预实验
ⅰ、过氧化物酶活性的测定
 1、实验目的
 1.1、通过从马铃薯外皮中提取过氧化物酶,掌握酶活性的测定方法和原理。
 1.2、学习使用分光光度计测定酶的活性。
 2、实验原理
 过氧化物酶是一种含铁卟啉的氧化酶。是利用H2O2将代谢中一些化合物氧化,其活性与呼吸作用和其一些生理过程有关。测定过氧化物酶的活性变化是植物生理和病理上一个常用的指标。
 过氧化物酶能催化过氧化氢对某些物质的氧化,如催化过氧化氢氧化愈伤木酚作为被氧化的基质,呈现的棕色可在OD470检测。
 3、实验材料、设备及试剂
 3.1、实验材料:马铃薯(外皮)
 3.2、仪器及设备:
 容量瓶(25ml)、量筒(25ml)、移液管(1ml)、研钵、试管架。
 72型分光光度计,电子天平,秒表。
 3.3、试剂:
 0.2M磷酸缓冲液(PH6.0): 将0.2M NaH2PO4 溶液87.7ml与0.2M Na2HPO4溶液12.3ml混合,蒸馏水稀释至200ml。
 反应混和液: 0.2M磷酸缓冲液(PH6.0)100ml,加入愈伤木酚0.019ml,开始实验前再加入30% H2O20.02ml,摇匀。
 4、实验步骤


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